如何驗(yàn)證fc受體信號(hào)通路激活
日期：2023-04-23 15:21:42
Fc受體（FcR）是廣泛存在于免疫細(xì)胞表面的一類受體，可以識(shí)別和結(jié)合抗體Fc段。Fc受體激活后，可通過一系列信號(hào)傳導(dǎo)通路調(diào)控細(xì)胞的生理功能。在研究中，為了證明Fc受體信號(hào)通路的激活，通常需要進(jìn)行下面的一些試驗(yàn)。
Western blotting分析
Western blotting能夠檢測(cè)到Fc受體激活后的下游蛋白質(zhì)的表達(dá)水平。當(dāng)Fc受體激活后，下游信號(hào)通路會(huì)被激活，并導(dǎo)致一系列蛋白質(zhì)的表達(dá)變化。將免疫細(xì)胞暴露于Fc受體激動(dòng)劑中，然后使用Western blotting技術(shù)檢測(cè)已知的信號(hào)通路蛋白的表達(dá)變化，如Lyn、Syk、Akt等。Western blotting還可以檢測(cè)蛋白質(zhì)的磷酸化狀態(tài)，利用磷酸化狀態(tài)的變化進(jìn)一步證實(shí)Fc受體信號(hào)通路的激活。
流式細(xì)胞術(shù)
流式細(xì)胞術(shù)通常用于檢測(cè)免疫細(xì)胞表面Fc受體的表達(dá)水平。通過使用攜帶熒光標(biāo)記的抗體，細(xì)胞表面Fc受體可以被檢測(cè)到。在Fc受體激動(dòng)劑處理后，使用流式細(xì)胞術(shù)同時(shí)檢測(cè)下游信號(hào)通路的蛋白質(zhì)表達(dá)水平（如CD69、CD25等）也是一種證實(shí)Fc受體信號(hào)通路激活的方法。
實(shí)時(shí)定量PCR分析
實(shí)時(shí)定量PCR可以用來檢測(cè)Fc受體激活后的mRNA表達(dá)水平。首先，提取免疫細(xì)胞總RNA，然后合成cDNA。之后，利用特異性引物和TaqMan探針來擴(kuò)增感興趣的基因，并通過實(shí)時(shí)熒光鑒定獲得擴(kuò)增產(chǎn)物的數(shù)量。這些數(shù)據(jù)可以進(jìn)一步用于比較組間樣本Fc受體信號(hào)通路激活的差異。
磷酸化技術(shù)
蛋白質(zhì)磷酸化是Fc受體信號(hào)通路激活的一個(gè)重要步驟。因此，對(duì)于Fc受體的磷酸化狀態(tài)進(jìn)行檢測(cè)，可以間接證實(shí)Fc受體信號(hào)通路的激活。主要有兩種技術(shù)可用于磷酸化檢測(cè)：磷酸化Western blotting和磷酸化抗體陣列。磷酸化抗體陣列可以同時(shí)檢測(cè)上千種蛋白質(zhì)的磷酸化狀態(tài)，是一種高通量的檢測(cè)方法。
通過Western blotting，流式細(xì)胞術(shù)，實(shí)時(shí)定量PCR和磷酸化技術(shù)等方法，可以檢測(cè)Fc受體激活后下游蛋白質(zhì)、mRNA表達(dá)及磷酸化狀態(tài)的變化情況，進(jìn)而間接證實(shí)Fc受體信號(hào)通路的激活。
