● 8大質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)
華美生物CUSABIO ELISA試劑盒是試劑配備完整、質(zhì)控嚴(yán)格、經(jīng)過驗(yàn)證的即用型ELISA試劑盒。在研發(fā)的過程中，采取多個(gè)嚴(yán)控的步驟以保證試劑盒的卓越品質(zhì)，保證提供給客戶的產(chǎn)品具有線性、特異性、穩(wěn)定性和靈敏度等的高標(biāo)準(zhǔn)。
通過線性范圍來計(jì)算出實(shí)際的檢測(cè)樣本值，定量試劑盒標(biāo)準(zhǔn)曲線的相關(guān)系數(shù)R大于0.99。以CSB-E07270h（人脂聯(lián)素(ADP)ELISA Kit）為例的標(biāo)準(zhǔn)曲線。
| ng/ml | OD1 | OD2 | Average | Corrected |
|---|---|---|---|---|
| 100 | 2.839 | 2.897 | 2.868 | 2.718 |
| 50 | 1.968 | 1.974 | 1.971 | 1.821 |
| 25 | 1.144 | 1.192 | 1.168 | 1.018 |
| 12.5 | 0.709 | 0.733 | 0.721 | 0.571 |
| 6.25 | 0.433 | 0.450 | 0.441 | 0.291 |
| 3.125 | 0.303 | 0.301 | 0.302 | 0.152 |
| 1.562 | 0.242 | 0.223 | 0.233 | 0.083 |
| 0 | 0.149 | 0.151 | 0.150 |
樣本經(jīng)梯度稀釋后檢測(cè)分析即為線性分析。線性是試劑盒準(zhǔn)確度和特異性的判定標(biāo)準(zhǔn)。為了評(píng)估測(cè)定的線性，在各種基質(zhì)中加入高濃度分析物的樣品，并用樣品稀釋劑稀釋以產(chǎn)生具有在測(cè)定的動(dòng)態(tài)范圍內(nèi)的值的樣品。對(duì)每種經(jīng)驗(yàn)證樣品類型進(jìn)行稀釋線性測(cè)試，如果結(jié)果是每種稀釋預(yù)期濃度的80%-120%，則視為良好。線性對(duì)于檢測(cè)動(dòng)態(tài)范圍內(nèi)分析物濃度的精確測(cè)量非常重要。
以CSB-E07270h（人脂聯(lián)素(ADP)ELISA Kit）為例：
血清樣品在1：100，1：200，1：400，1：800下稀釋。細(xì)胞培養(yǎng)物上清液在,1：2， 1：4，1：8，1:16下稀釋。測(cè)試值在80-120％之間并顯示出良好的線性。
| Sample | Serum(n=4) | |
|---|---|---|
| 1:100 | Average( %) | 91 |
| Range ( %) | 85-97 | |
| 1:200 | Average( %) | 97 |
| Range ( %) | 91-103 | |
| 1:400 | Average( %) | 93 |
| Range ( %) | 85-95 | |
| 1:800 | Average( %) | 95 |
| Range ( %) | 90-100 |
| Sample | Cell Culture Supernates(n=4) | |
|---|---|---|
| 1:1 | Average( %) | 95 |
| Range ( %) | 83-101 | |
| 1:2 | Average( %) | 97 |
| Range ( %) | 86-115 | |
| 1:4 | Average( %) | 90 |
| Range ( %) | 83-98 | |
| 1:8 | Average( %) | 91 |
| Range ( %) | 80-107 |
最低檢測(cè)限是靈敏度的測(cè)試指標(biāo)。由使用的抗體效價(jià)等決定的，在研發(fā)過程中，一般會(huì)優(yōu)化保證高靈敏度、低背景的檢測(cè)結(jié)果從而大大提高試劑盒的靈敏度。檢測(cè)限越低，靈敏度越高。通過將零標(biāo)準(zhǔn)重復(fù)獲得的平均 O.D. 加上3個(gè)標(biāo)準(zhǔn)偏差來確定靈敏度。
CV (%) 或變異系數(shù)代表了測(cè)定的一致性，即同一樣本重復(fù)測(cè)定的符合程度。
一般是選取同一批次或者不同批次的試劑盒對(duì)不同濃度的樣本進(jìn)行定量檢測(cè)，需要盡量降低批次差異帶來的系統(tǒng)誤差，保證相同樣本結(jié)果的重復(fù)性。
應(yīng)考慮兩種類型的精度：批內(nèi)精確度和批間精確度。
批內(nèi)精確度：同一批次內(nèi)精密度測(cè)試方法：用低、中、高值待測(cè)樣本對(duì)同一批次的產(chǎn)品分別重復(fù)測(cè)定20次(n)，計(jì)算該20次測(cè)量結(jié)果的平均值和標(biāo)準(zhǔn)差(SD)，根據(jù)公式CV＝標(biāo)準(zhǔn)差/平均值×100％，計(jì)算變異系數(shù)(CV)，以評(píng)估CSB-E07270h（人脂聯(lián)素(ADP)ELISA Kit）的精確度：CV％<8％。
批間精確度：不同批次間精密度測(cè)試方法：用低、中、高值待測(cè)樣本，對(duì)3個(gè)批次的產(chǎn)品分別重復(fù)測(cè)定20次(n)，計(jì)算該20次測(cè)量結(jié)果的平均值和標(biāo)準(zhǔn)差(SD)，根據(jù)公式CV＝標(biāo)準(zhǔn)差/平均值×100％，計(jì)算變異系數(shù)(CV)，以評(píng)估CSB-E07270h（人脂聯(lián)素(ADP)ELISA Kit）的精確度：CV％<10％。
| Intra-Assay Precision | Inter-Assay Precision | |||||
|---|---|---|---|---|---|---|
| Sample | 1 | 2 | 3 | 1 | 2 | 3 |
| n | 20 | 20 | 20 | 20 | 20 | 20 |
| Mean(ng/ml) | 5.345 | 16.273 | 29.471 | 29.471 | 20.841 | 34.563 |
| SD | 0.24 | 0.62 | 0.62 | 0.43 | 1.65 | 2.34 |
| CV(%) | 4.49 | 3.81 | 6.42 | 5.14 | 7.92 | 6.77 |
特異性是ELISA試劑盒的關(guān)鍵指標(biāo)。主要受到不同物種間的高同源性蛋白、靶蛋白配體或靶蛋白受體的干擾。CUSABIO選擇具有高特異性的原料，以確保ELISA試劑盒的優(yōu)異特異性，分析交叉反應(yīng)和干擾，確認(rèn)只能識(shí)別和檢測(cè)目標(biāo)分析物。
回收率=靶蛋白的測(cè)定濃度/添加的靶蛋白濃度*100%
它反映了樣品分析過程中分析物的損失程度，回收率越高，準(zhǔn)確度越高。
回收實(shí)驗(yàn)可檢測(cè)試劑盒是否受干擾因子的影響，以不添加蛋白的天然樣本基質(zhì)為空白對(duì)照，回收率應(yīng)介于80%-120%，表明試劑盒的性能較好。
以CSB-E07270h（人脂聯(lián)素，ADP ELISA試劑盒）為例的回收率。
| Sample Type | Average(%) | Range(%) |
|---|---|---|
| Serum (n=5) | 95 | 89-98 |
| EDTA plasma (n=4) | 97 | 90-100 |
穩(wěn)定性越好，存儲(chǔ)時(shí)間越長(zhǎng)。
通常采用加速降解的方法來推斷試劑盒的有效期。通常試劑盒在37℃放置一天折合有效期2個(gè)月，實(shí)際工作中，一般將試劑盒在37℃破壞4-7天后，然后檢測(cè)上述指標(biāo)，觀察是否在范圍內(nèi)。也可留樣至有效期后進(jìn)行檢驗(yàn)，來衡量有效期，對(duì)于批量大的指標(biāo)，可將加速降解和留樣檢驗(yàn)相結(jié)合的方法。
將CUSABIO ELISA試劑盒的主要原料和測(cè)定板在37℃下熱損傷測(cè)試7天，然后與在4℃下儲(chǔ)存的原料進(jìn)行比較。 7天后，OD值≤30％，這是合格的。部分試劑能經(jīng)受住60度高溫的熱損傷，最大程度的避免了長(zhǎng)途運(yùn)輸和保存過程中抗原抗體的失活。
避免使用有外源性污染的樣本，避免血樣本出現(xiàn)溶血、細(xì)菌污染，最好使用較新鮮樣本，避免反復(fù)凍融。
CUSABIO ELISA試劑盒可以檢測(cè)天然樣品，根據(jù)靶點(diǎn)性質(zhì)對(duì)天然樣本進(jìn)行選擇（血清，血漿、細(xì)胞上清等），為客戶提供最真實(shí)的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)參考。
以CSB-E07270h（人脂聯(lián)素(ADP)ELISA Kit）為例，我們?cè)谥耙?：500稀釋度測(cè)試血清和血漿樣品，測(cè)試值為S3-S5。
● 15大研究領(lǐng)域
● 涵蓋20+種屬
華美生物 ELISA試劑盒涵蓋20多個(gè)種屬，涉及多個(gè)研究領(lǐng)域，可滿足不同客戶的需求。
● 檢測(cè)樣本豐富
華美生物ELISA試劑盒可檢測(cè)多種生物樣品，包括：血清、血漿、體液如尿液、細(xì)胞培養(yǎng)上清液和細(xì)胞/組織裂解液等。
● 科研即用型
每個(gè)ELISA試劑盒由包被好抗體的板子和即用型試劑組成。無需特殊處理，操作簡(jiǎn)單。
● 20,000+已發(fā)表文獻(xiàn)
華美生物ELISA試劑盒受到全球數(shù)千名研究人員的信賴，并引用到了許多優(yōu)秀的高分期刊上，如：Nature,Science, Cell, Immunity, Nature Medicine, Cell Metabolism, Gastroenterology 等。
