熒光定量pcr試劑盒原理
日期：2023-11-24 14:02:50
熒光定量PCR（Polymerase Chain Reaction）試劑盒是一種用于測(cè)定DNA或RNA樣本中特定序列的數(shù)量的試劑盒。其原理如下：
? DNA擴(kuò)增：首先，將待測(cè)樣本中的DNA通過(guò)PCR技術(shù)進(jìn)行擴(kuò)增。PCR是一種體外的DNA復(fù)制過(guò)程，利用DNA聚合酶酶作用下的溫度循環(huán)，使DNA序列得以快速擴(kuò)增。
? 靶標(biāo)序列擴(kuò)增：PCR反應(yīng)中使用引物（primers）選擇性地識(shí)別和結(jié)合目標(biāo)DNA序列的兩個(gè)端部，形成DNA復(fù)制的起始點(diǎn)。在PCR循環(huán)中，引物會(huì)被DNA聚合酶酶作用下延伸，產(chǎn)生兩條新的DNA鏈。
? 熒光探針檢測(cè)：在熒光定量PCR中，引物和熒光探針（probe）同時(shí)使用。熒光探針通常由一個(gè)與目標(biāo)序列互補(bǔ)的DNA片段和一個(gè)與熒光染料結(jié)合的短鏈上的熒光基團(tuán)組成。
? 信號(hào)累積：當(dāng)PCR反應(yīng)進(jìn)行時(shí)，DNA聚合酶會(huì)沿著DNA模板鏈進(jìn)行擴(kuò)增，并在到達(dá)熒光探針的位置時(shí)，酶會(huì)切開熒光探針，釋放熒光染料。因此，隨著PCR的進(jìn)行，熒光信號(hào)會(huì)不斷增加。
? 熒光檢測(cè)與定量：熒光信號(hào)可通過(guò)特定的熒光檢測(cè)系統(tǒng)進(jìn)行實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)。檢測(cè)系統(tǒng)會(huì)記錄PCR反應(yīng)過(guò)程中的熒光信號(hào)強(qiáng)度，并通過(guò)內(nèi)部標(biāo)準(zhǔn)曲線等方法，將信號(hào)轉(zhuǎn)化為目標(biāo)序列的數(shù)量。
? 通過(guò)以上步驟，熒光定量PCR試劑盒可以快速、準(zhǔn)確地測(cè)定樣本中特定DNA或RNA序列的數(shù)量，廣泛應(yīng)用于基因表達(dá)分析、病原體檢測(cè)、基因突變分析等領(lǐng)域。
