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CHF鹿流行性出血熱病毒多克隆抗體制備方法

日期：2023-08-16 11:11:17


    鹿流行性出血熱（Cervid Hemorrhagic Fever，CHF）是一種由鹿流行性出血熱病毒（Cervid Herpesvirus 2，CvHV-2）引起的疾病。以下是制備鹿流行性出血熱病毒多克隆抗體的一般步驟：
 
?    病毒培養(yǎng)：首先，需要獲取鹿流行性出血熱病毒的感染細胞株或病毒培養(yǎng)物。將病毒接種到合適的細胞培養(yǎng)基中，以便病毒能夠進行復制和增殖。
 
?    動物免疫：選擇合適的實驗動物（如小鼠、兔子等），將其注射鹿流行性出血熱病毒制備的病毒懸液或感染細胞。在一定時間間隔內進行多次免疫，通常使用完整病毒顆粒或相關蛋白質作為免疫原。
 
?    血清采集：在動物完成免疫后，采集其血清進行抗體檢測。通過離心等方法將血液離心分離，得到血清。
 
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?    抗體檢測：使用鹿流行性出血熱病毒進行抗體檢測，常用的方法包括酶聯免疫吸附試驗（ELISA）、間接免疫熒光染色等。通過檢測血清中的抗體效價和特異性，篩選出具有高效率和特異性的陽性動物。
 
?    細胞融合：從陽性動物中提取脾細胞或骨髓細胞。將這些細胞與骨髓瘤細胞（如SP2/0）融合，形成雜交瘤細胞。這些雜交瘤細胞能夠長期穩(wěn)定地分泌特異性抗體。
 
?    雜交瘤細胞篩選：在培養(yǎng)基中添加適當的選擇劑，例如HAT（含有嘌呤、滴定惡唑和膽堿酯酶抑制劑的培養(yǎng)基），以選擇出能夠進行細胞融合的偶合細胞并抑制未融合的懸浮細胞生長。
 
?    單克隆抗體篩選：從雜交瘤細胞培養(yǎng)基中分離出單個細胞，將其分別培養(yǎng)在96孔板中，使其擴增成獨立的細胞克隆。然后，對這些細胞進行免疫學篩選，使用特定的鹿流行性出血熱病毒抗原進行ELISA或其他相關方法檢測細胞上清中特異性抗體的存在。
 
?    抗體擴增和純化：對于篩選出的單克隆細胞，可以通過大規(guī)模的細胞培養(yǎng)和采集上清液來擴增抗體產量。隨后，采用親和層析、蛋白A/G純化等方法將抗體純化。
 
?    制備多克隆抗體是一個復雜的過程，步驟可能根據實驗室的具體要求和技術條件有所不同。在進行實驗之前，請詳細閱讀相關的文獻和資料，并遵循實驗室內的操作規(guī)范和安全操作指南。