生物素蛋白

1. 什么是生物素化蛋白質(zhì)？

生物素化蛋白質(zhì)是一類蛋白質(zhì)，其中氨基酸或糖基部分通過化學(xué)或酶法與生物素分子共價(jià)結(jié)合。

2. 為什么蛋白質(zhì)需要進(jìn)行生物素化？

生物素在分子生物學(xué)和生物技術(shù)中廣泛用作蛋白質(zhì)或抗體的結(jié)合物。它是由植物和許多原核生物產(chǎn)生的小型水溶性分子。生物素和鏈霉親和素或鳥苷酸的結(jié)合是已知非共價(jià)生物相互作用中最強(qiáng)的之一。重組或純化蛋白質(zhì)的生物素化將生物素的生化特性引入目標(biāo)蛋白質(zhì)中，而不干擾原始蛋白質(zhì)本身的特性。除了生物素與鏈霉親和素結(jié)合的親和性強(qiáng)外，其相對(duì)較小的大小和易于衍生化的戊二酰側(cè)鏈?zhǔn)蛊浞浅＿m合標(biāo)記蛋白質(zhì)。

3. 蛋白質(zhì)如何生物素化？

蛋白質(zhì)可以通過酶法或化學(xué)法進(jìn)行生物素化。蛋白質(zhì)的化學(xué)生物素化可以在體外用化學(xué)試劑實(shí)現(xiàn)，這使得生物素可以與蛋白質(zhì)上的任何反應(yīng)性功能基團(tuán)共價(jià)耦合。然而，化學(xué)生物素化缺乏重復(fù)性，并且因蛋白質(zhì)之間反應(yīng)性功能基團(tuán)的可用性而有所不同。添加的生物素?cái)?shù)量不一致，并且生物素與目標(biāo)蛋白質(zhì)的結(jié)合是不可控的。而且，某些賴氨酸殘基的修飾可能導(dǎo)致結(jié)合位點(diǎn)失活。

華美生物的生物素化蛋白質(zhì)是通過酶法制備的。Avi-tag是一個(gè)由15個(gè)氨基酸組成的小肽序列，融合在感興趣的蛋白質(zhì)的N端或C端。在融合表達(dá)后，帶有Avitag的蛋白質(zhì)可以在體內(nèi)或體外通過生物素蛋白連接酶（BPL）與賴氨酸殘基結(jié)合，從而實(shí)現(xiàn)蛋白質(zhì)的生物素化?；贏vitag技術(shù)的蛋白質(zhì)生物素化確保生物素僅發(fā)生在Avitag的賴氨酸殘基上，并且不影響目標(biāo)蛋白質(zhì)的自然結(jié)合活性。

4. 生物素化蛋白質(zhì)有什么用途？

任何生物素化蛋白質(zhì)都可以與蛋白質(zhì)結(jié)合的卵清蛋白親和素和真菌蛋白鏈霉親和素緊密結(jié)合。用生物素標(biāo)記重組或純化的蛋白質(zhì)可用于蛋白質(zhì)的捕獲、純化、固定和功能化，以及多聚化或橋聯(lián)分子。生物素化蛋白質(zhì)可以通過鏈霉親和素包被的柱或珠子進(jìn)行簡單純化。

生物素化蛋白質(zhì)常常與鏈霉親和素結(jié)合物一起在許多蛋白質(zhì)研究應(yīng)用中進(jìn)行檢測或純化，包括酶聯(lián)免疫吸附測定（ELISA）、蛋白質(zhì)印跡（Western blot）分析、免疫組化（IHC）、免疫共沉淀（IP）以及其他親和純化、細(xì)胞表面標(biāo)記和流式細(xì)胞儀/熒光激活細(xì)胞分選（FACS）等方法。

華美生物的生物素化蛋白質(zhì)已經(jīng)進(jìn)行了預(yù)標(biāo)記和實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證。它們的活性高，純度高，批間變異性低，并且具有優(yōu)異的檢測靈敏度。以下是一些生物素化蛋白質(zhì)的列表：

Recombinant Human CD44, partial, Biotinylated (Active) (CSB-MP004938HU(F1)j1-B)

純度> 92%

(tris -甘氨酸凝膠)不連續(xù)SDS-PAGE(還原)，5%富集凝膠和15%分離凝膠。

活性

通過酶聯(lián)免疫吸附測定其結(jié)合能力。2 μg/ml的固定抗CD44小鼠單克隆抗體（CSB-MA004938A0m）能與生物素化的人CD44結(jié)合，EC₅₀為2.865 ~ 5.099 ng/ml。

Recombinant HumanTNFSF14, partial, Biotinylated (Active) (CSB-MP023991HUj7-B)

純度> 92%

(tris -甘氨酸凝膠)不連續(xù)SDS-PAGE(還原)，5%富集凝膠和15%分離凝膠。

活性

通過酶聯(lián)免疫吸附測定其結(jié)合能力。固定的人TNFRSF14（CSB-MP842173HU）在5 μg/ml時(shí)能與生物素化的人TNFRSF14結(jié)合，EC₅₀為1.773 ~ 3.707 ng/ml。

Recombinant Human GHR, partial, Biotinylated (Active) (CSB-MP009411HUj1-B)

純度> 95%

(tris -甘氨酸凝膠)不連續(xù)SDS-PAGE(還原)，5%富集凝膠和15%分離凝膠。

活性

通過酶聯(lián)免疫吸附測定其結(jié)合能力。10 μg/ml的固定化KLRK1（CSB-MP012474HU1）能與人生物素化ULBP1結(jié)合，EC₅₀為4.254 ~ 7.295 ng/ml。

Recombinant Human GHR, partial, Biotinylated (Active) (CSB-MP009411HUj1-B)

純度> 95%

(tris -甘氨酸凝膠)不連續(xù)SDS-PAGE(還原)，5%富集凝膠和15%分離凝膠。

活性

通過酶聯(lián)免疫吸附測定其結(jié)合能力。10 μg/ml的固定化KLRK1（CSB-MP012474HU1）能與人生物素化ULBP1結(jié)合，EC₅₀為4.254 ~ 7.295 ng/ml。

Recombinant Human TNFSF13B, partial (Active) (CSB-MP897523HU1-B)

純度> 92%

(tris -甘氨酸凝膠)不連續(xù)SDS-PAGE(還原)，5%富集凝膠和15%分離凝膠。

活性

通過酶聯(lián)免疫吸附測定其結(jié)合能力。10 μg/ml的固定化人BCMA（CSB-MP023974HU1）能與人生物素化TNFSF13B結(jié)合，EC₅₀為0.1752-0.3657 ng/ml。

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