ELISA 試劑盒質(zhì)控流程
華美生物嚴(yán)格的生產(chǎn)和質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)是ELISA試劑盒質(zhì)量的根本保障。華美生物ELISA試劑盒的質(zhì)控指標(biāo)包括:供線性范圍,線性,檢測(cè)下限,精度,回收率,穩(wěn)定性和天然樣品檢測(cè)。指標(biāo)詳情如下:
1、線性范圍
通過(guò)線性范圍,我們可以計(jì)算出待測(cè)試樣本值。下圖為CSB-E07270h(人脂聯(lián)素,ADP ELISA試劑盒)的標(biāo)準(zhǔn)曲線。
ng/ml | OD1 | OD2 | Average | Corrected |
---|---|---|---|---|
100 | 2.839 | 2.897 | 2.868 | 2.718 |
50 | 1.968 | 1.974 | 1.971 | 1.821 |
25 | 1.144 | 1.192 | 1.168 | 1.018 |
12.5 | 0.709 | 0.733 | 0.721 | 0.571 |
6.25 | 0.433 | 0.450 | 0.441 | 0.291 |
3.125 | 0.303 | 0.301 | 0.302 | 0.152 |
1.562 | 0.242 | 0.223 | 0.233 | 0.083 |
0 | 0.149 | 0.151 | 0.150 |
2、線性
線性是實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)確性和特異性的測(cè)試指標(biāo)。為了測(cè)定線性,在基質(zhì)中加入高濃度分析物的樣品并用樣品稀釋液稀釋,生成的產(chǎn)物可在測(cè)定的動(dòng)態(tài)范圍內(nèi)有值,結(jié)果表示為觀察到的百分比。
以CSB-E07270h(人脂聯(lián)素,ADP酶聯(lián)免疫吸附試劑盒)為例:
血清樣品稀釋比分別為:1:100、1:200、1:400和1:800。
細(xì)胞培養(yǎng)物上清液稀釋比分別為1:1、1:2、1:4和1:8。
測(cè)試值在80-120%之間并顯示出良好的線性。
Sample | Serum(n=4) | |
---|---|---|
1:100 | Average( %) | 91 |
Range ( %) | 85-97 | |
1:200 | Average( %) | 97 |
Range ( %) | 91-103 | |
1:400 | Average( %) | 93 |
Range ( %) | 85-95 | |
1:800 | Average( %) | 95 |
Range ( %) | 90-100 |
Sample | Cell Culture Supernates(n=4) | |
---|---|---|
1:1 | Average( %) | 97 |
Range ( %) | 80-100 | |
1:2 | Average( %) | 95 |
Range ( %) | 91-110 | |
1:4 | Average( %) | 90 |
Range ( %) | 85-95 | |
1:8 | Average( %) | 96 |
Range ( %) | 90-100 |
3、檢測(cè)下限
檢測(cè)下限是靈敏度檢測(cè)指標(biāo)。檢測(cè)下限越低,靈敏度越高。
4、精度
精度是重復(fù)性的檢測(cè)指標(biāo),是從平均值中測(cè)量的變異系數(shù)(CV)。 精度越高,重復(fù)性越好。 常考慮的精度有兩種:批內(nèi)精度和批間精度。
批內(nèi)精度:批內(nèi)精度是測(cè)定中孔之間的可重復(fù)性。在一個(gè)平板上反復(fù)檢測(cè)三個(gè)已知濃度的樣品達(dá)二十次來(lái)評(píng)估CSB-E07270h(人脂連蛋白,ADP ELISA試劑盒)的精確度:CV%<8%。
批間精度:批間精度是分析不同批次間的可重復(fù)性。 在20批次中,檢測(cè)三個(gè)已知濃度的樣品以評(píng)估CSB-E07270h(人脂聯(lián)素,ADP ELISA試劑盒)的精確度:CV%<10%。
Intra-Assay Precision | Inter-Assay Precision | |||||
---|---|---|---|---|---|---|
Sample | 1 | 2 | 3 | 1 | 2 | 3 |
n | 20 | 20 | 20 | 20 | 20 | 20 |
Mean(ng/ml) | 13.215 | 12.894 | 13.438 | 12.897 | 13.109 | 12.963 |
SD | 0.63 | 0.37 | 0.53 | 1.10 | 0.81 | 1.00 |
CV(%) | 4.75 | 2.847 | 3.931 | 8.562 | 6.145 | 7.741 |
5、回收率
回收率是實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)確性和特異性的檢測(cè)指標(biāo),它反映了樣品分析過(guò)程中分析物的損失程度。 回收率越高,精度越高。
華美生物試劑盒,在各種基質(zhì)中,分析物的回收率在整個(gè)測(cè)定范圍內(nèi)都達(dá)到了很高的水平。
下圖為CSB-E07270h(人脂連蛋白,ADP ELISA試劑盒)的回收率:
Sample Type | Average(%) | Range(%) |
---|---|---|
Serum (n=5) | 95 | 89-98 |
EDTA plasma (n=4) | 97 | 90-100 |
6、試劑盒組分穩(wěn)定
一般來(lái)說(shuō),穩(wěn)定性越好,存儲(chǔ)時(shí)間越長(zhǎng)。試劑盒組分穩(wěn)定性檢測(cè):將華美生物ELISA試劑盒的主要原料和測(cè)定板置于37℃下熱損傷測(cè)試7天,然后再與4℃下儲(chǔ)存的原料進(jìn)行比較。若是7天后,原料OD值≤30%,即為合格產(chǎn)品。
7、特異性
特異性是ELISA試劑盒質(zhì)量的關(guān)鍵指標(biāo)。華美生物ELISA試劑盒均選用高特異性原料,以確保ELISA試劑盒的特異性。另外,研發(fā)團(tuán)隊(duì)會(huì)進(jìn)一步分析試劑盒的交叉反應(yīng),進(jìn)一步確認(rèn)該試劑盒能且只能識(shí)別和檢測(cè)目的分析物。
8、天然樣品檢測(cè)
天然樣品檢測(cè)對(duì)于ELISA試劑盒的推廣至關(guān)重要。 華美生物ELISA試劑盒可以檢測(cè)自然樣品,樣品值均可供用戶參考。 對(duì)于CSB-E07270h(人脂聯(lián)素,ADP ELISA試劑盒),我們?cè)谥耙?:500稀釋度測(cè)試血清和血漿樣品,測(cè)試值為S3-S5。